荧光分光光度计的概述和应用
概述用于荧光分析的仪器称为荧光(分光光度)计。荧光计若配有偏振附件,则能进行荧光偏振测量。近代的荧光分光光度计还能进行化学发光参数的测量。荧光分析法的优点:灵敏度高,能提供激发光谱、发射光谱、发光强度、发光寿命、量子产率、荧光偏振等许多信息,工作曲线线性范围宽等。
1荧光偏振及各向异性测量
在偏振光激发下,荧光体所发射的荧光在空间不同取向强度不同,即亦是偏振光。由于荧光偏振不仅与荧光体分子形状,荧光体吸光对偏振激发的取向,光选择性以及其它许多外界因素,从而在生化领域得到广泛应用。如测定生物分子间的缔合反应量,膜内微粘度,,蛋白质的衰变和转动速度的研究。
2时间分辨荧光光谱
时间分辨荧光光谱技术是基于不同发光体发光衰减速度寿命的不同,从而可对光谱重叠但寿命有差异的组分进行分辨和分别测定,用于荧光寿命的测量。
3同步扫描
根据激发和发射单色器在扫描过程中彼此间所保持的关系,同步扫描技术可分为固定波长差,固定能量差,和可变角同步扫描三类。
同步扫描技术具有使光谱简化,谱带窄化,提高分辨率,减少光谱重叠提高选择性,减少散射光影响等诸多优点。
4三维光谱
三维荧光光谱技术能获得激发波长和发射波长同时变化时的荧光强度信息。在石油勘采中可用于油气显示和矿源判定;在环境监测和法庭判证中用于类似可疑物的鉴别;临床中用于癌细胞的辅助诊断和不同细菌的表征和鉴别;用于化学反应动力学研究。采用三维技术进行多组分混合物的定性、定量分析是分析化学的重点之一。
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