生物芯片技术流程

生物芯片技术流程

生物芯片技术不仅能够提供极为丰富的信息，而且使用芯片的流程也不复杂。主要包括四个基本要点：芯片方阵的构建、样品的制备、生物分子反应和信号的检测及分析。首先是准备好芯片和待检测样品。采用光导原位合成或微量点样等方面，将大量生物大分子如核酸片段、多肽分子甚至组织切片、细胞等生物样品有序地固化于支持物（如玻片、硅片、聚丙烯酰胺凝胶或尼龙膜等载体）的表面，组成密集二维分子排列，然后与已标记的待测生物样品中靶分子杂交。如果是检测表达谱，就需要从待检测样品mRNA或者total RNA中制备cDNA探针，与芯征杂交；如果是SNP检测，则需要从待检测样品GenomicDNA中通过PCR制备探针。芯片杂交属于固-液相杂交，与常规的Southern杂交相似，经过高严谨度的洗涤后进行结果检测。制作者需要根据探针标记分子的种类和芯片的规格来选择检测方法。对于Macroarrayg 一类的胶膜芯片，可选择同位素标记、化学发光法标记，检测时需要X光片压片曝光-显影-扫描记录，再选用相应的软件进行数据分析。条件较好的实验室也可以选用磷屏成像系统代替X光片，直接成像并进行定量分析。通过比较芯片上相同位置上的基因（即同一基因）在不同样品的杂交信号，就可以得到这一基因在不同样品中的表达信息。对于Microarray一类的玻离片基芯片，通常使用的标记方法是荧光标记，通过特殊的芯片扫描仪扫描和相应的软件进行数据分析。
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