固定化pH 梯度等电聚焦电泳及其装置

固定化pH 梯度等电聚焦电泳及其装置
a ．固定化pH 梯度等电聚焦电泳
　　固定化pH 梯度（immobilized pH gradients IPG）等电聚焦电泳通常是指采用商品名为immobiline ( LKB , Sweden）的化合物，制备pH 梯度电泳胶，进行等电聚焦电泳的方法。
　　immobilines 是一组酰胺衍生物，基本结构为CH2＝CH?CO?NH?R。取代基R 可以是羧酸基或三级胺。在制胶时，将带有不同取代基（具有不同的pK 值）的immobiline 随需要加入，经过聚合，梭基或氨基化学键合到聚合物上，从而形成一个由低到高的固定化pH 梯度。目前提供的immobiline 的pH 范围可以从3 到10 ，可根据需要选用不同的immobilines，从而制备出从单体的最低pH 到最高pH 的不同pH 范围的电泳胶。
　　与采用Ampholytes 作为载体两性电解质的等电聚焦电泳相比，这种固定化的pH 梯度胶可以将胶的pH 范围做得很窄，从而对蛋白质的分辨率大大提高。例如可将一个20 厘米长的胶的pH 范围做到4.35～4.55，每厘米pH 差异达0 . 01 ，即被分离物质的等电点相差在0 . 01 时，可获得很好的分离。immobiline 固定化pH 梯度胶的另一个突出优点是，通过键合形成的pH 梯度十分稳定，即使在采用很窄的pH 范围、分离很复杂的蛋白质混合物而需要长时间电泳的情况下亦是如此。
b ．制胶装置
　　采用immobiline 固定化pH 梯度等电聚焦电泳分离复杂蛋白质混合物，其关键是制备重现性好的理想的pH 梯度胶。下图为制备IPG 胶的基本方法示意图。


　　为了达到重现性好和理想的pH 梯度，设计了多种梯度胶的装备，如下图所示。



　　四种pH 梯度胶制备装置的性能比较见下表。

　　固定化pH 梯度等电聚焦电泳的电泳仪同传统的等电聚焦电泳，仅需要在电压电流的控制上作调整。

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