光纤的紫外共振拉曼光谱研究生物系统 摘要
紫外共振拉曼光谱(UVRRS)已经出现了涉及生物系统作为诊断技术在其使用的急剧增加。 UVRRS拥有许多优势,包括能够获得振动(因此结构)下的考试系统的信息。之前我们已经证实了使用光纤(FO)的在交付激发光收集和由此产生的拉曼信号[1] UVRRS探头。
FO的探头提供了传统的集中UVRRS配电优势,允许在电源样品,同时保持相同的功率密度的增加[2]。这使得光纤的紫外共振拉曼光谱(FO - UVRRS)的理想适合光敏生物分子的研究。我们将研究一种酶(BphD)属于元裂解产品(MCP)家族,从我们的工作提出结果。这种酶催化2 - 羟基-6-氧 - 五-2 ,4-dienoic酸的微生物降解途径(HOPDA)不寻常的碳 - 碳键的水解。
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酸碱度计 BphD构成环境中的多氯联苯的生物降解途径中的一个瓶颈。而MCP水解包含“催化三联”和水解酶家族的结构倍,一些研究表明,他们偏离古典水解反应机制的。特别是,最近的研究表明,水解可能,而不是通过宝石二醇中间,而不是典型的共价酰基酶发生。更重要的是,烯醇 - 酮互变异构的HOPDA已经提出这个有趣的化学转化作为催化力量源。直接的酶 - 底物中间的光谱观测是不可能的,因为中间的过渡性质。相反,BphD突变的准备,这将使我们的“陷阱”绑定的酶底物。我们用FO-UVRRS获得拉曼光谱的酶(E)和酶的底物混合物(ES)。采用差分光谱,我们获得关键的结构信息,涉及衬底。虽然HOPDA烯醇异构体在溶液中的存在,我们表明,HOPDA酮异构体中的酶结合,支持拟议的烯醇 - 酮互变异构机制。