影响凝胶色谱图的重要因素

影响凝胶色谱图的重要因素
由实验得到的凝胶色谱图，再结合标定线进行分子量分布的计算。因而必须保持标定色谱柱和测定试样对实验条件的一致性，否则将会引起谱图的位置、形状、宽度的变化导致计算结果的误差。另外实验条件本身选择不合适也会影响色谱图。
　　a ．流速
　　目前，凝胶色谱实验中，一般直接记录谱图的淋出体积（或保留时间）作为计算参数。流速的变化将直接影响谱图的淋出体积，1％的流速变化会引起分子量的误差达8％。因此，要求输液泵流速稳定在1％以内。同样，记录仪纸速恒定也很重要，需恒定在0.2％以内。
　　b ．进样浓度
　　凝胶色谱图与进样浓度有关，随着进样浓度的增加，色谱图后移，变宽甚至出现多峰。当分子量愈大，溶剂愈良好，流速愈大，分布愈宽时，色谱图的浓度依赖性表现愈明显。一旦谱图有了浓度依赖性，其后果是：所计算的分子量偏小，分布变宽、分离效率变差。因此配制高分子溶液时，在检测器灵敏度允许范围内应尽可能低。当采用示差检测器时，浊度计| 色度计| 粘度计| 折射计| 滴定仪| 密度计| 热流计| 浓度计| 折射仪| 采样仪| 如高分子与溶剂的折光指数差很小，必须配制较高浓度才能得到足够的信号，这时为了消除浓度对峰位的影响，可采用不同浓度进样，然后，以峰位对浓度作图，求得外推浓度至零时的峰值。此法只适用于低分子量（M < 5×105），因为在高分子量高浓度时，峰值对浓度作图为非线性的。
　　在凝胶色谱实验中还有一个导致谱图后移的是由大分子降解引起。当大分子流经色谱柱时由于剪切作用产生降解，它随流速增加而增加，故是机械降解。影响降解的因素很多，当分子量愈大、浓度愈高、溶剂性能愈差、色谱柱填料愈细、降解愈严重。为了消除色谱图的浓度依赖性，有人曾采用θ溶剂，但从降解的角度来看是非常不利的。因此，对高分子量聚合物需综合选择实验条件，尽可能选低浓度、低流速以确保结果的可靠。